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本次培训主要是Leica的快速投入式冷冻制样仪(EMGP)、高真空镀膜仪(EMACE)和冷冻光电关联显微镜(THUNDERImagerEMCryoCLEM)等三款冷冻制样及相关设备:
快速投入式冷冻制样仪(EMGP):快速投入冷冻技术是指在有微孔的碳膜上滴加样品悬液,用滤纸吸去多余液体,将载网插入到冷冻剂(如液态乙烷)中进行快速冷冻。碳膜微孔内的样品迅速玻璃化形成冰膜。将玻璃化的样品低温传输到冷冻透射电镜下进行图像采集,通过三维重构技术可获得生物大分子复合物的近原子级三维结构信息。该仪器专门为冷冻透射电镜(Cryo-TEM)制备蛋白、病毒等悬液样品以及细胞的冷冻电镜样品设计,采用红外线传感器精准控制滤纸进行平行吸附,使样品分布均匀,不破坏碳膜,可获得载网上最大面积可用样品。
冷冻光电关联显微镜(THUNDERImagerEMCryoCLEM):为光电联用工作流提供关键定位功能的低温光学成像系统。通过快速、安全、无污染的样品传输和装载,在低温下实现冷冻样品的高分辨光学成像,特异性地定位目标结构,并引导在电镜中快速而准确地识别别感兴趣的细胞结构,深入理解细胞结构生物学。
高真空镀膜仪(EMACE):采用隔膜泵和涡轮分子泵无油真空系统,常温下极限真空度可达2×10-6mbar。有多种可选的镀膜方式,包括电子束蒸发镀膜和磁控溅射镀膜等,镀膜颗粒细腻均匀;内置石英膜厚检测器,可精确控制镀膜膜厚,全自动电脑控制,自动完成抽真空、镀膜、放气等全过程。ACE镀膜可以用于生物样品的表面导电化处理、DNA小角度金属投影可视化、亲水化处理,还可以选配冷冻台用于真空冷冻传输、冷冻断裂和冷冻干燥处理等实验流程。
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