将获得的组织细胞接入培养瓶或培养板中的过程称为培养。如系组织块培养，则直接将组织块接入培养器皿底部，几个小时后组织块可贴牢在底部，再参加培养基。如系细胞培养，一般应在接入培养器皿之前进行细胞计数，按要求以必定的量（以每毫升细胞数表示）接入培养器皿并直接参加培养基。细胞进入培养器皿后，立即放入培养箱中，使细胞尽早进入成长状态。

正在培养中的细胞应每隔必守时刻调查一次，调查的内容包含细胞是否成长杰出，形状是否正常，有无污染，培养基的PH是否太酸或太碱（由酚红指示剂指示），此外对培养温度和CO2浓度也要守时检查。

细胞培养一般所需要首要仪器设备如下：

AlphaClean洁净台

HF二氧化碳培养箱

奥利巴斯倒置显微镜

Neofuge15离心机

细胞培养常见问题剖析：

1、细胞逝世的或许原因：

A：如果是污染，最或许的是支原体，一般在培养两周左右细胞基本悉数逝世；

B：血清浓度：大于15%培养液即偏黄；

C：CO·是否缺乏；

D：细胞传代次数过多，细胞老化；

2、PH改变快的原因：

A：二氧化碳张力不对；

B：培养瓶塞拧得太紧；

C：缓冲体系缓冲力缺乏；

D：培养液中盐浓度不正确；

E：.细菌、酵母、真菌等污染

3、冷冻管应怎么冻结：

取出冷冻管后，须立即放入37℃水槽中快速冻结，轻摇冷冻管使其在1分钟内悉数消融，并留意水面不行超越冷冻管盖沿，不然易产生污染景象。

另冷冻管由液氮桶中取出冻结时，有必要留意安全，预防冷冻管之爆裂

4、细胞冷冻管冻结培养时，是否应立刻去除DMSO：

除少数特别注明对DMSO灵敏之细胞外，绝大部分细胞株（包含悬浮性细胞），在冻结之后，应直接放入含有10-15ml新鲜培养基之培养角瓶中，待隔天再置换新鲜培养基以去除DMSO即可，如此可防止大部分冻结后细胞无法成长或贴附之问题。

5、可否运用与原先培养条件不同之培养基？

不能，每一细胞株均有其特定运用且已习惯之细胞培养基，若骤然运用和原先供给之培养条件不同之培养基，细胞大都无法立即习惯，构成细胞无法存活

6、培养基中是否需增加抗生素？

除于特别筛选体系中外，一般正常培养状态下，培养基中不该增加任何抗生素。

7、欲将一般动物细胞离心下来，其离心速率应为多少转速？

回收动物细胞，其离心力约为xg(约RPM)，5-10分钟，过高之转速，将构成细胞逝世.

8、应怎么防止细胞污染？

细胞污染的品种可分红细菌、酵母菌、霉菌、病毒和霉浆菌。首要的污染原因为无菌操作技能不妥、操作室环境不佳、污染之血清和污染之细胞等。严格之无菌操作技能、清洁的环境、与品质杰出之细胞来源和培养基配制是减低污染之最好办法，选择的CO2培养箱最好具有高温消毒功用，一旦呈现污染立刻能够进行彻底消毒，市面上有90℃高温湿热灭菌型，如HF90培养箱，还有别的一种高端型℃高温干热灭菌培养箱，如HF二氧化碳培养箱。

9、可否运用与原先培养条件不同之血清品种？

不能，血清是细胞培养上一个极为重要的营养来源，所以血清的品种和品质关于细胞的成长会产生极大的影响。来自不同物种的血清，在一些物质或分子的量或内容物上都有所不同，血清运用错误常会构成细胞无法存活。

10、培养细胞时应运用5%或10%CO2？或根本没有影响？

一般培养基中大都运用HCO3-/CO32-/H+作为pH的缓冲体系，而培养基中NaHCO3的含量将决定细胞培养时应运用的CO2浓度。当培养基中NaHCO3含量为每公升3.7g时，细胞培养时应运用10%CO2；当培养基中NaHCO3为每公升1.5g时，则应运用5%CO2培养细胞，

11、冷冻保存细胞之办法：

冷冻保存办法一:冷冻管置于4℃，30~60min→(-20℃，30min)→（-80℃，16~18h(或隔夜)）→液氮槽长期贮存。

冷冻保存办法二:冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3℃至–80℃以下，再放入液氮槽长期贮存（-20℃不行超越1H），以防止冰晶过大，构成细胞很多逝世，亦可越过此步骤直接放入-80℃冰箱中，惟存活率略微降低一些。

HFLTP86超低温冰箱

12、保存血清最好的办法?

主张血清应保存在-5℃至-20℃（推荐HFLTP25（）低温冰箱）。然而，若存放于4℃时，请勿超越一个月。若您一次无法用完一瓶，主张您无菌分装血清至恰当的灭菌容器内，再放回冷冻。

13、怎么冻结血清才不会使产品质量受损?

主张您将血清从冷冻箱取出后，先置于2～8℃冰箱使之溶解（推荐HFLTP05（）冷藏箱），然后在室温下使之全融。但有必要留意的是，融解过程中有必要规则地摇晃均匀。

14、血清冻结后发现有絮状沉积物呈现，该怎么处理：

血清中沉积物的呈现有许多种原因，但最普遍的原因是由于血清中脂蛋白的变性所构成，而血纤维蛋白(构成凝血的蛋白之一)在血清冻结后，也会存在于血清中，亦是构成沉积物的首要原因之一。但这些絮状沉积物，并不影响血清自身的质量。若欲去除这些絮状沉积物，能够将血清分装至无菌离心管内，以*g略微离心,上清液即可接着参加培养基内一同过滤。咱们不主张您以过滤的办法去除这些絮状沉积物，因为它或许会阻塞您的过滤膜。

15、为什么贮存在冰箱中的胎牛血清会呈现沉积：

胎牛血清没有预老化，贮存在2－8℃时，血清中的各种蛋白和脂蛋白（如冷凝集素、纤维蛋白原、玻粘连蛋白等）或许聚集而构成沉积或可见的混浊。这应该不会影响血清的质量。推荐在－20℃贮存胎牛血清（推荐HFLTP25（）低温冰箱），防止重复冻融。

参考文献：《组织培养和分子细胞学技能》北京出版社